Estrategia de genotipado del gen FMR1: Método de diagnóstico alternativo para el Síndrome X Frágil y otras enfermedades por expansión de trinucleotidos

Autores

  • Saúl Lindo-Samanamud Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Escuela de Genética y Biotecnología y Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima.
  • Mario Cornejo-Olivas Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Northern Pacific Global Health Research Training Consortium, Bethesda.
  • Olimpio Ortega Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima.
  • Victoria Marca Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima
  • Keren Espinoza-Huertas Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Escuela de Genética y Biotecnología y Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima.
  • Pilar Mazzetti Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Northern Pacific Global Health Research Training Consortium, Bethesda.

DOI:

https://doi.org/10.20453/rmh.v24i4.269

Resumo

Objetivos: Diseñar una estrategia alternativa por PCR para el genotipado de secuencias ricas en citosinas, basada en modificación nucleotídica. Material y métodos: Se modificó el gen FMR1 nativo de ocho individuos clínicamente no afectados por el Síndrome X frágil, cambiando las citosinas por uracilos, empleando bisulfito de sodio. El ADN modificado fue purificado y cuantificado por espectrofotometría. Las estructuras alternativas y potenciales islas CpG que adopta el microsatélite inestable fueron simuladas con los programas MFOLD y CpGplot. Se generaron cebadores específicos que hibriden tanto con el microsatélite modificado (Primer T) y con una secuencia modificada de las islas CpG (Primer M), utilizando el programa MethPrimer. Finalmente, ambas secuencias fueron amplificadas por PCR y los amplicones fueron separados por electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE por sus siglas en inglés) al 6% y visualizados con tinción de nitrato de plata. Resultados: La modificación del ADN fue evidenciada por espectrofotometría al uracilo. Las estructuras observadas en la simulación fueron las horquillas encontrándose dos potenciales islas CpG. La amplificación con los cebadores T, confirmó el diseño in silico desarrollado para abordar la estructura en horquillas. La amplificación con los cebadores M permitió detectar metilación de la primera isla CpG del gen FMR1.Conclusión: Se propone un diseño alternativo para amplificación de secuencias de microsatélite que contengan citosinas metiladas y no metiladas. Se requieren estudios posteriores con muestras de ADN que contengan microsatélites muy expandidos para validar su aplicación para diagnóstico molecular.

Biografia do Autor

Mario Cornejo-Olivas, Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Northern Pacific Global Health Research Training Consortium, Bethesda.

Médico Neurólogo

Pilar Mazzetti, Servicio de Neurogenética, Instituto Nacional de Ciencias Neurológicas, Lima. Northern Pacific Global Health Research Training Consortium, Bethesda.

Médico Neurólogo

Publicado

2013-12-19

Como Citar

1.
Lindo-Samanamud S, Cornejo-Olivas M, Ortega O, Marca V, Espinoza-Huertas K, Mazzetti P. Estrategia de genotipado del gen FMR1: Método de diagnóstico alternativo para el Síndrome X Frágil y otras enfermedades por expansión de trinucleotidos. Rev Méd Hered [Internet]. 19º de dezembro de 2013 [citado 20º de maio de 2024];24(4):269. Disponível em: https://revistas.upch.edu.pe/index.php/RMH/article/view/269

Edição

Seção

INVESTIGACION ORIGINAL