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Rev Estomatol Herediana. 2021 Ene-Mar;31(1): 6-16
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Atribución 4.0 Internacional.
Actividad antioxidante del gel a base de
extracto de Origanum vulgare ¿Importante
para la salud bucal? Estudio preliminar
Antioxidant activity of Origanum vulgare extract gel. Is it important for oral health?. Preliminary study
Luis Galvez-Calla
1,a
, María A. Alvarez-Páucar
2,b,c
, Omar Alcázar-Aguilar
3,b,d
, Frank Mayta-Tovalino
4,b,e
,
Felipe Lozano-Castro
2,b,f
, Edwin Cordova-Huayanay
5,b,g
, Roxana Revoredo-Morote
2,b,h,
RESUMEN
Objetivo: Determinar la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de Origanum vulgare a través de 03
métodos de ensayo DPPH, ABTS y FRAP. Material y métodos: La muestra recolectada de Origanum vulgare
se secó, redujo el tamaño y se colocó a macerar 500 gramos de muestra seca en 1000 mL de etanol 97% durante
una semana. Pasado el tiempo se procedió a filtrar el macerado y se concentró en estufa. Se procedió a realizar las
formulaciones. Estas diluciones, se sometieron a los análisis antioxidantes. Resultados: Método DPPH, el gel al
25% mostró un IC
50
de 98,485 mg/mL equivalente a la dilución del 78,789% y para el caso del estándar Trolox®
presentó un IC
50
de 2,48 µg/mL. Método ABTS, la formulación de gel al 25% presentó un IC
50
de 3,687 mg/mL
equivalente a una dilución de 77,75% y para el estándar Trolox® presentó un IC
50
de 2,99 µg/mL, a diferencia de
las otras formulaciones. Se evidenció relación entre el porcentaje de inhibición y concentración de las muestras
con una correlación aceptada (R
2
) para geles al 25%, 50%, 75% de extracto de Origanum vulgare y Trolox® de
0,9972; 0,9987 y 0,9986 respectivamente. Método FRAP, observó acción rápida durante los 4 minutos, siendo
1
Departamento Académico de Ciencias Básicas, Facultad de Odontología, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Perú.
2
Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Perú.
3
Universidad Alas Peruanas. Lima, Perú.
4
Universidad Científica del Sur. Lima, Perú.
5
Departamento de Estomatología Rehabilitadora, Facultad de Odontología Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Perú.
a
Doctor en Estomatología.
b
Docente
c
Doctor en Ciencias de la Salud; Especialista en Odontopediatría; Postgraduada en Competencias para la Formulación y Dirección de
Proyectos de Investigación.
d
Magíster en Docencia Universitaria y Gestión Educativa; Especialista en Ortodoncia y Ortopedia Maxilar; Doctorando en Estomatología,
e
Magíster en Estomatología; Especialista en Estadística en Investigación
f
Magíster en Estomatología; Especialista en Rehabilitación Oral; PostGraduado en Formulación y Dirección de Proyectos de Innovación
Educativa.
g
Maestro en Estomatología
h
Especialista en Ortodoncia y Ortopedia Maxilar; Master en Gerencia Pública.
ARTÍCULO ORIGINAL / ORIGINAL ARTICLE
Rev Estomatol Herediana. 2021 Ene-Mar;31(1): 6-16
DOI: https://doi.org/10.20453/reh.v31i1.3921
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Rev Estomatol Herediana. 2021 Ene-Mar;31(1): 6-16
Actividad antioxidante del gel a base de extracto de Origanum
vulgare ¿Importante para la salud bucal? Estudio preliminar
Galvez-Calla L. y col.
125 mg de extracto contenido en el gel de 25% equivalente a 4mg de Trolox®. Conclusiones: Se determinó la
actividad antioxidante equivalente al Trolox®, mediante análisis antioxidante, con mejor poder de captación
de radical libre promedio (Trolox/mg) de extracto y estuvo presente en el gel a base de Extracto de Origanum
vulgare al 25%.
PALABRAS CLAVES: antioxidantes, estrés oxidativo, Origanum vulgare, radicales libres, salud bucal.
SUMMARY
Objective: To determine the antioxidant activity of the hydroalcoholic extract of Origanum vulgare through
DPPH, ABTS and FRAP essays. Material and Methods: The sample collected from Origanum vulgare was dried,
reduced in size and placed to macerate 500 grams of dry sample in 1000 mL of 97% ethanol for one week. After
time, the macerate was processed through a filter and concentrated in an oven. The formulations were carried out
and the dilutions were analyzed with the antioxidant essays. Results: DPPH Method, the 25% gel showed an IC
50
of 98.485 mg / mL equivalent to the dilution of 78.789% and for the Trolox® standard, it presented IC
50
of 2.48
µg / mL. ABTS Method, the 25% gel formulation presented IC
50
of 3.687 mg / mL equivalent to a dilution of
77.75% and for the Trolox® standard it presented IC
50
of 2.99 µg / mL, a difference from the other formulations.
The results evidenced a relation between the percentage of inhibition and concentration of the samples with an
accepted correlation (R2) for the gels at 25%, 50%, 75% of extract of Origanum vulgare and Trolox® of 0.9972;
0.9987 and 0.9986 respectively. FRAP Method, with fast action during the 4 minutes, being 125 mg of extract
contained in the gel 25% equivalent to 4mg of Trolox®. Conclusions: It was determined that the antioxidant
activity equivalent to Trolox®, with antioxidant assays, with the best average free radical uptake power (Trolox
/ mg) of extract was present in the gel of Extract of Origanum vulgare 25%.
KEY WORDS: antioxidants, free radicals, oral health, Origanum vulgare, oxidative stress.
INTRODUCCIÓN
Actualmente, diversos estudios demuestran la
asociación entre Estrés Oxidativo y Enfermedades
Orales, especialmente el papel de los radicales libres
en el desarrollo de la enfermedad y la acción de los
antioxidantes en su fase preventiva y curativa. Las
células del sistema inmune crean radicales libres
para matar bacterias y virus, pero si no hay un
equilibrio (control ejercido por antioxidantes), estas
células no se reconocen y llegan a dañar a las células
sanas. Los radicales libres o metabolitos reactivos
del oxígeno (MRO), son moléculas formados en el
cuerpo durante el metabolismo celular normal o por
la exposición a toxinas ambientales (contaminantes
en el aire, alimentos y agua), estos radicales libres
pueden ser dañinos, ya que poseen un electrón no
apareado (configuración inestable), de extraordinaria
reactividad y enorme capacidad para combinarse
inespecíficamente con lípidos, proteínas, ácidos
nucleicos y derivados de cada uno de ellos, importante
en la patogenia de la enfermedad (1,2).
Cuando la defensa antioxidante es insuficiente
para proteger al organismo, ocurre ruptura del
equilibrio entre sustancias antioxidantes y oxidantes
a beneficio de los radicales libres, factor llamado
estrés oxidativo, el exceso de oxígeno resulta
potencialmente peligroso debido a la formación de
MRO (1,3,4,5). El estrés oxidativo severo puede
causar daño celular y muerte, implica presencia de
patologías: aterosclerosis, psoriasis, diabetes mellitus,
disfunción inmune, enfermedades orales, entre otros
(1,5,6). La oxidación celular tiene vinculación en el
papel fisiológico y patogénico de las enfermedades
orales, se ha demostrado la relación entre el estrés
oxidativo y el proceso inflamatorio de enfermedades
gingivales y periodontales, lesiones de mucosa oral,
inflamación pulpar y trastornos temporomandibulares;
en pacientes con enfermedad periodontal crónica, se
observó efectos genotóxicos en la mucosa, aumento
del estrés oxidativo y aumento en la producción de
radicales libres (7). El envejecimiento y el desarrollo
no son fases disímiles de la vida, el envejecimiento
(fase final del desarrollo), si bien no es un fenómeno
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genéticamente programado, esto ocurre por el influjo
del estrés oxidativo en el evento genético, aquí radica
la importancia de la terapia antioxidante y de la dieta
sobre las enfermedades (8). El consumo de nutrientes
antioxidantes (compuestos no tóxicos: vitamina E,
betacaroteno, licopeno y selenio), reducen el riesgo
de padecer cáncer y de las condiciones precancerosas,
el consumo de frutas, verduras, la ingesta de
polifenoles previene enfermedades no transmisibles
(9,10). Además, reduce la incidencia del cáncer oral
(reduce el stress oxidativo) en personas que padecen
enfermedades sistémicas.
Es importante, valorar la CA (capacidad de
capturar un radical o reducir un agente antioxidante),
donde se utilizan métodos basados en el monitoreo
espectrofotométrico de la formación o desaparición
de compuestos cromogénicos de naturaleza radical,
entre ellos DPPH (2,2-difenil-1-picrylhydrazyl),
ABTS 2,20-azino-bis (ácido 3-etilbenzo-tiazolina- 6-
sulfónico), ORAC (capacidad de absorción de
radicales de oxígeno), FRAP (capacidad de
reducción férrica de plasma), entre otros. Se sabe
que, la determinación de polifenoles totales en una
muestra, lo señala como un buen indicador de CA en
alimentos (vegetales, frutas), plantas, estos métodos
monitoreados por espectrofotometría UV-visible
y algunos de ellos dan una medición directa de CA
(métodos ABTS y DPPH), porque se basan en una
captura directa del radical por la muestra; otros
ensayos (métodos FRAP y Folin-Ciocalteu) dan una
medición indirecta de CA (10), incluso estas pruebas
(métodos Folin-Ciocalteu, DPPH y FRAP), sirven
para indicar la cantidad necesaria de antioxidante
natural que se debe agregar a productos cárnicos (11).
Una posible solución para el cuidado de la salud
oral sería, el uso de antioxidantes de determinadas
plantas, que ayuden a los antioxidantes endógenos a
neutralizar el estrés oxidativo hasta la aplicación de
productos naturales. El objetivo de nuestro estudio
preliminar, fue determinar la capacidad antioxidante
de los geles a base de extracto hidroalcohólico de
Origanum vulgare.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se efectuó un estudio in vitro y de tipo transversal,
sobre la actividad antioxidante del gel formulado
con el extracto de la planta entera Origanum vulgare
(OV) a concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%,
empleando pruebas de captura de radicales libres en
métodos DPPH, ABTS y FRAP.
Recolección de la planta
Las hojas del Origanum vulgare fueron recogidas
de parcelas artesanales ubicadas en el distrito de
Ilaballa, provincia de Jorge Basadre, departamento de
Tacna.
Herbal classification
El análisis de la planta fue realizado en el
Laboratorio de Botánica y Recursos Genéticos,
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad
Nacional Jorge Basadre Grohmann (Tacna). La
sistemática de las especies según Sistema de
Clasificación de APG III (Angiosperm Phylogen
Group III, 2009) es como sigue: Orden: Lámidas,
Familia: Lamiaceae, Género: Origanum, Especie:
vulgare. Nombre científico: Origanum vulgare.
Preparación del extracto antioxidante natural.
Se recolectaron 2kg de hojas de Origanum vulgare
y transportadas al Laboratorio de Farmacognosia,
Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional Mayor de San Marcos (Lima), previamente
seleccionadas, sólo hojas en buenas condiciones,
sin daño, ni atacadas por hongos, ni decoloradas, ni
marchitadas. Se lavó́ las hojas con agua destilada
y se desinfectó con hipoclorito de sodio 0,5%. Las
hojas fueron colocadas en papel Kraft, luego se
llevó́ a secar a la estufa de circulación de aire por
convección forzada a 40°C por 48 horas. Enseguida
del secado, las hojas se pulverizaron mediante un
mortero. El polvo fue almacenado en un frasco de
vidrio ámbar de boca ancha y pesó con exactitud
500gr de Origanum vulgare. Luego se maceraron en
un frasco de vidrio ámbar de boca ancha de 1L de
capacidad y se añadió́ etanol 96° cantidad suficiente
hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Se
mezcló bien, se tapó́ el recipiente y se maceró por
7días, agitándose 15minutos, dos veces al día. Luego
el macerado fue concentrado en una estufa hasta
sequedad. Posteriormente, se procedió a realizar las
formulaciones y realizar los análisis antioxidantes
DPPH, ABTS y FRAP.
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Determinación de la capacidad antioxidante in vitro
del extracto de la planta entera
a. Método de DPPH (actividad secuestradora del
radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo)
Se realizó en las instalaciones de la Facultad de
Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor
de San Marcos, Servicio Académico Asistencial
de Análisis Clínico. El DPPH, es un indicador
para medir la capacidad de secuestro de cualquier
compuesto con actividad antioxidante. La reacción
desarrolla un cambio de color violeta a amarillo a
medida que disminuye la absorbancia a 515 nm. Se
siguió la metodología descrita por Portes et. al., (12),
siendo ampliamete usado en difrentes muestras y de
fácil preparación.
Se preparó el Reactivo DPPH de la siguiente
manera: Se pesó 39,43mg aproximadamente en la
balanza analítica y se disolvió con metanol hasta
100mL para obtener una concentración de 1mM. Se
usó como blanco metanol. Para acceder al reactivo de
trabajo, se tomaron 500 µL de muestra con 500µL de
reactivo DPPH y se hizo reaccionar por 30 minutos a
temperatura ambiente en oscuridad. Pasado el tiempo
se leyó a 540nm.
b. Método de ABTS (ácido 2,2- azinobis-3-etil
benzotiazolina-6-sulfónico)
Se realizó en las instalaciones de la Facultad de
Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor
de San Marcos, Servicio Académico Asistencial de
Análisis Clínico. Se siguió la metodología según
Kuskoski et. al., (13), debido a su simplicidad al
momento de la preparación del radical libre y a su
amplia aplicabilidad. Método monitoreado por
espectrofotometría UV-visible y algunos de ellos dan
una medición directa sobre la capacidad de capturar
un radical o reducir un agente antioxidante (junto al
método ABTS está la prueba DPPH).
Se preparó la solución A: Se disolvió 38.4 mg de
ABTS en 10 mL de agua destilada y la solución B: Se
disolvió 378,4 mg de persulfato de potasio en 10 mL
de agua destilada. Para acceder al reactivo de trabajo,
en un beacker limpio se tomó 10 mL de sol. A y se
mezcló con 176 µL de sol. B. Se dejó reaccionar por
16 horas en total oscuridad, concluido el tiempo se
diluyó el reactivo de trabajo con agua destilada hasta
obtener una absorbancia de 0,7 ± 0,05 a 734nm y se
usó como blanco agua destilada. Para la reacción,
se tomó en un beacker limpio 20µL de muestra y se
hizo reaccionar con 980µL de reactivo ABTS por 10
minutos en oscuridad a temperatura ambiente y se usó
como blanco agua destilada. Concluido el tiempo se
leyó a 734nm. Se usó como unidad de medida estándar
el Trolox. Los resultados fueron expresados en
porcentaje de inhibición de la formación de radicales
ABTS.
c. Método FRAP (poder antioxidante de la reducción
férrica, por sus siglas en inglés)
Se realizó en las instalaciones de la Facultad de
Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor
de San Marcos, Servicio Académico Asistencial de
Análisis Clínico. Se siguió la metodología según
Sonawane et. al., (14), debido a que es el más utilizado
para este tipo de muestras semisólidas miscibles con
agua. Método monitoreado por espectrofotometría
UV-visible y medición indirecta sobre la capacidad de
capturar un radical o reducir un agente antioxidante,
su fundamento radica en la capacidad para reducir el
complejo de fierro.
Se preparó la solución A: Buffer acetato 0,3 M a un
pH 3,8 (4,9 gramos de acetato de sodio + 24mL ácido
acético glacial, completar con agua destilada hasta
1 L), luego la solución B: 0,01M TPTZ (312,33mg
TPTZ) en 0,04M HCl (320 µL HCl 37% hasta 100 mL
agua) y por último la solución C: 0,02M FeCl
3
.6H
2
O
(540,6 mg FeCl
3
.6H
2
O hasta 100mL agua). Para
acceder al reactivo de trabajo, en un frasco ámbar
de tapa rosca con capacidad suficiente se mezcló 1L
de sol. A + 100 mL de sol. B + 100 mL de sol. C,
luego se dejó reaccionar por 1 hora a 37°C, 4 horas a
temperatura ambiente. Para la reacción, se tomó 800
µL de reactivo de trabajo y se hizo reaccionar con
200µL de muestra, por 4 minutos de manera cinética
con intervalos de 1 minuto, la absorbancia durante
el ensayo fue de 593nm. Se usó como blanco agua
destilada y diluyente de muestra en las proporciones
de 4:1.
RESULTADOS
La actividad antioxidante del gel a base de
extracto de orégano fue evaluada por los métodos de
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DPPH y del radical catiónico ABTS; los resultados de
la muestra fueron comparados frente al Trolox®, un
análogo soluble a la vitamina E, con características
antioxidantes. Los ensayos evaluados en las
formulaciones del gel al 25; 50; 75 % se realizaron
por quintuplicado, y por triplicado para el estándar
Trolox®. Se calculó el IC
50
(concentración inhibitoria
media) en μg de extracto contenido en la formulación
/mL, este dato corresponde a la cantidad de extracto
en la dilución del gel que reduce en un 50% la
absorbancia de la solución contenedora de radicales.
Para el DPPH, la primera formulación presentó un
IC
50
de 98,485 mg/mL equivalente a la dilución de
78,789% del gel al 25%. Para las formulaciones del
50 y 75% presentaron IC
50
de 131,742 y 119,037 mg/
mL respectivamente, equivalentes a las diluciones del
52,69% y 31,734% de sus respectivas formulaciones.
Para el caso del estándar Trolox®, presentó un IC
50
de 2,48 ug/mL. La asociación entre los elementos
evaluados como Porcentaje de inhibición y
concentración de las muestras obtuvo una correlación
aceptada, con Coeficientes de Pearson (R
2
) para el gel
al 25; 50; 75% y Trolox® de: 0,9941; 0,9988; 0,9974
y 0,9991 respectivamente (gráfico 1 y gráfico 2).
Gráfico 1. Porcentaje de Inhibición del radical DPPH vs Diluciones del gel al 25%
Gráfico 2. Porcentaje de Inhibición del radical DPPH vs concentración de Trolox®
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Para las formulaciones del 25; 50 y 75% mediante
el ensayo del radical catiónico de ABTS presentaron
IC
50
de 3,687; 5,329 y 5,561 mg/mL equivalentes
a las diluciones de 77,75; 44,951 y 37,068
respectivamente. Para el estándar Trolox® el IC
50
fue
de 2,99 µg/mL. La asociación entre el porcentaje de
inhibición y concentración de las muestras presenta
una correlación aceptada, con Coeficientes de Pearson
(R
2
) para el gel al 25; 50; 75% y Trolox® de: 0,9972;
0,9987; 0,9986 y 0,9986 respectivamente (gráfico 3 y
gráfico 4). Por otro lado, la diferencia de medias de la
absorbancia es significativa en el nivel 0,05 (ANOVA
Post hoc Tukey) del Trolox frente a las pruebas ABTS
y DPPH.
Los TEAC (Capacidad antioxidante equivalente al
Trolox), mediante el método del ABTS, fue de 0,8125
µg de Trolox/mg de extracto presentes en gel al 25%.
Y el TEAC según método de DPPH es de 0,025 µg de
Trolox/mg de extracto presente en el gel al 25%.
Gráfico 3. Porcentaje de Inhibición del radical ABTS vs Diluciones del gel al 25%
Gráfico 4. Porcentaje de Inhibición del radical ABTS vs concentraciones de Trolox
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Gráfico 5. Ecuación de la recta de la curva de calibración de Trolox.
En Método FRAP, el análisis se realizó de manera
cinética durante 5 minutos, el poder reductor de
hierro de la muestra fue excelente, muy potente al
inicio, pero se detuvo, para mantenerse en el tiempo
(acción rápida), logrando superar al Trolox® los
primeros 4 minutos y luego su actividad se mantuvo
de manera indefinida. Observándose esa tendencia en
todas las series 1-5, equivalentes a 2, 4, 6, 8 y 10mg/
mL respectivamente. En este análisis no se aplicó
ninguna fórmula para calcular el poder reductor;
sino que se realizó mediante interpolación usando la
curva de calibración de Trolox® (gráfico 5). Por lo
tanto, 125 mg de extracto contenido en el gel al 25%
equivale a 4 mg de Trolox®.
DISCUSIÓN
La Organización Mundial de la Salud (OMS)
en el 2020, cita que la tasa de morbilidad por
enfermedades bucodentales y otras enfermedades no
transmisibles pueden reducirse por intervenciones
de salud pública dirigidas a los factores de riesgo
más comunes, mediante una reforma en los sistemas
de salud, implica prestar atención a la prevención
y tratamientos menores, descartando tratamientos
dentales invasivos; la mayoría de enfermedades
y trastornos bucodentales conllevan factores de
riesgo modificables (consumo de: alcohol, tabaco
y alimentación malsana ricos en azúcares libres)
comunes a las 04 principales enfermedades no
transmisibles como: enfermedades cardiovasculares,
cáncer, enfermedades respiratorias y diabetes mellitus
(15). Recientes estudios demuestran que la oxidación
celular tiene vinculación en el papel fisiológico y
patogénico de las enfermedades orales, por ende,
aumenta el riesgo de enfermedades no transmisibles.
En Perú, la salud bucal constituye problema de Salud
Pública.
La comunidad científica muestra alto interés en los
compuestos bioactivos y su relación en la disminución
del riesgo de enfermedades no transmisibles. La
aplicación de los métodos de detección in vitro,
como: DPPH, ABTS podrían ayudar a diseñar
futuros estudios de investigación sobre “compuestos
bioactivos” (16). El Origanum vulgare contiene
fuentes ricas en compuestos bioactivos, incluidos
los ácidos fenólicos y los flavonoides como los más
abundantes (17). La medición de concentraciones
de fenoles totales, flavonoides y otros quimiotipos
como carvacrol y timol, se realizan mediante
espectrofotometría UV y ofrece un índice químico
rápido, sin embrago, las técnicas cromatográficas
sirven para establecer la actividad de la estructura
(11). La evaluación de la actividad antioxidante se
determina mediante la comparación de los diferentes
ensayos empleados (18,19).
El presente estudio usó métodos: ABTS, DPPH y
FRAP para determinar la magnitud de los componentes
fenólicos que contiene el Origanum vulgare (OV), para
captar los radicales libres generados contra el proceso
Actividad antioxidante del gel a base de extracto de Origanum
vulgare ¿Importante para la salud bucal? Estudio preliminar
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de oxidación. Los estudios indican que los métodos
ABTS y DPPH, presentan alta estabilidad en ciertas
condiciones y miden 02 mecanismos: transferencia
de electrón y transferencia de átomos de hidrógeno
(18, 20,21), aunque también revelan diferencias,
el ABTS tiene la ventaja que su espectro indica
máximos de absorbancia a 414, 654, 754 y 815nm
en medio alcohólico, mientras que el DPPH observa
un pico de observancia a 515nm (13). Mientras que,
el FRAP mide la capacidad reductora del hierro en
las condiciones de extracción de la muestra (22), y
evalúa la cuantificación de transferencia de electrones
(18,20,21). Aunque, algunos estudios revelaron que
la prueba Folin-Ciocalteu y AlCl3 se utilizan para
evaluar los fenólicos y flavonoides totales (16), otros
estudios registraron que, la actividad antioxidante
in vitro y el contenido fenólico total medidos con el
reactivo Folin-Ciocalteu no son los apropiados (23). La
cromatografía líquida-espectroscopía de masas (LC-
MS) o el método HPLC, aún no son métodos estándar
comunes, para identificar valores antioxidantes en la
investigación científica, estas técnicas de vanguardia,
identifican y cuantifican con precisión el contenido
de compuestos bioactivos, especialmente fenólicos
en alimentos y extractos herbales; sin embargo,
los métodos de detección espectrofotométrica se
usan para caracterizar materiales y dar una idea del
contenido fenólico total (24). El presente trabajo,
optó por el ensayo in vitro, porque los ensayos in
vivo presentan inconvenientes y adaptabilidad en la
respuesta al aumento del stress oxidativo (10,13).
El presente estudio, optó por evaluar la actividad
antioxidante (captación del radical libre) del
extracto hidroalcohólico de OV, considerando
que, la composición agua/etanol, se encuentra en
el extracto hidroalcohólico (HA) en sus diferentes
concentraciones. La concentración DPPH en el
medio de reacción se calculó a partir de la curva
de calibración, determinada por regresión lineal (r
= 0.994): Y= 0,6038X – 2,4267, el porcentaje de
DPPH restante contra la concentración del extracto
se trazó para obtener la cantidad de antioxidante
necesaria para disminuir la concentración inicial
de DPPH en un IC
50
. Coincidiendo con Cavero et.
al., en el 2006 (25), que también siguió su curva de
calibración, siendo su determinación por regresión
lineal (r = 0.999): Y= 0,0247X – 0,0029; asimismo,
observó, cuánto menor es el IC
50
, mayor es el poder
antioxidante y cada determinación se repitió 2 veces,
a diferencia de nuestro trabajo, que los ensayos
evaluados en las formulaciones del gel 25; 50; 75 %
se corrió 5 veces, y para el estándar Trolox® 3 veces,
su estudio reportó valores del IC
50
entre 53,8 y 118,3
µg/mL en la fracción 1 y entre 69,4 y 169,7 µg/mL
en la fracción 2. Sin embargo, Moghrovyan et. al., en
el 2019 (26), registró valores más bajos en el DPPH,
con un IC
50
de 19.97 μg/mL en el extracto etanólico
de OV, infiriendo mayor poder antioxidante respecto
al anterior trabajo, siguiendo esa misma tendencia,
nuestro trabajo refirió un IC
50
de 2,48 µg/mL para
el caso estándard Trolox® en el gel de extracto HA
de orégano al 25% (muestra que obtuvo mejores
resultados) y una capacidad antioxidante equivalente
al Trolox de 0,025 µg TE/mg de extracto HA presente
en el gel al 25%. Fierescau et. al., en el 2018 (27),
mostró importante actividad antioxidante de hierbas
silvestres como: Momordica charantia L., Humulus
lupulus L., Origanum vulgare L. entre otros, con
un DPPH para OV de 173.67±6.91μg TE/mg, valor
alto respecto a nuestro estudio, que podría deberse al
empleo del extracto de metanol de OV. Por otro lado,
Texeira et. al., en el 2013 (28), mostró pobre actividad
antioxidante del aceite esencial de OV, del extracto de
agua fría con moderada actividad, el extracto etanólico
presentó un fuerte valor y el extracto de agua caliente
observó la mayor actividad, de acuerdo al índice
AAI (Indice de Actividad Antioxidante). Existen
resultados controversiales respecto a 02 variedades de
Orégano, Méabed et. al., en el 2018 (29), observó que
el contenido total fenólicos, flavonoides y actividad
antioxidante de DPPH del extracto de Origanum
majorana, fue de 12,34 ± 0,1 mg/mL, valor alto que
se podría inferir en menor activdad antioxidante,
aunque los resultados pueden ser controversiales, ha
sido ampliamente corroborada la acción antioxidante
del OV.
Respecto al ensayo ABTS, el presente trabajo
observó que el IC
50
para el gel elaborado al 25% con
el extracto de orégano, requirió la dilución al 73,74%
equivalente a 3,68mg/mL de extracto HA de OV; para
el caso estándard Trolox® presentó un IC
50
de 2,99
µg/mL y una capacidad antioxidante equivalente al
Trolox de 0,8125 µg TE/mg de extracto presentes en
el gel al 25%. Fierescau et. al., en el 2018 (27) hallaron
un alto valor en la prueba ABTS de 422,06 ±9,61 μg
TE/mg, este resultado podría deberse al empleo del
extracto de OV obtenido del metanol, sin embargo,
el estudio de Chun et. al., en el 2005 (30), notó que
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vulgare ¿Importante para la salud bucal? Estudio preliminar
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el porcentaje de inhibición de ABTS en muestras
de orégano, fue mayor en extractos de agua que en
extractos de etanol, lo que indica, la sensibilidad del
ensayo hacia los antioxidantes solubles en agua.
Con el método FRAP, el poder reductor de hierro
de la muestra fue excelente, potente y de acción
rápida, los primeros 4 minutos, luego su actividad se
detuvo de manera indefinida, esto indica que se logró
superar el Trolox®. Se halló 125mg de extracto HA
de Origanum vulgare contenido en el gel de 25%
y equivale a 4mg de Trolox. El estudio de Texeira
et. al., en el 2013 (28), reveló una mayor actividad
antioxidante en el extracto de aceite esencial y en el
extracto de agua fría, seguido del extracto de agua
caliente y por último en el extracto etanólico de OV,
sin embargo, el análisis de poder reductor mostró
estadísticamente una mayor actividad antioxidante
en el extracto de agua caliente, seguido del extracto
etanólico, el extracto de agua fría y el aceite esencial,
siendo el valor referencial FRAP, para el extracto
etanólico de 12,6 ± 0,1 μM Fe
+2
/g, sin embargo,
Fierescau et. al., en el 2018 (27), registró 9,64 ± 0,96
mM Fe
+2
/mg, este alto valor, podría deberse al empleo
del extracto de OV obtenido del metanol.
Aunque, la capacidad antioxidante de una muestra
compuesta de varias moléculas electroactivas, no lo
proporciona la suma de las capacidades antioxidantes
individuales de sus componentes, sino del tipo de
suelo (microambiente) que la nutre, periodo de
floración, periodo de cosecha, entre otros factores,
obteniéndose un efecto sinérgico o inhibitorio. La
recolección de la muestra del presente trabajo, se
realizó en el periodo de floración (mes de julio).
A nivel oral, el aumento del estrés oxidativo puede
provocar dentinogénesis, mediante la disminución de
la actividad de las células de la pulpa dental; pero la
davallilactona (antioxidante derivado de hongos de
origen natural) reduce la producción de peróxido de
hidrógeno y otras moléculas inflamatorias, formación
de MRO y alteraciones en la mineralización de
la dentina. En periodontitis (infección bacteriana
que produce inflamación crónica de la encía), se
observa aumento de: flujo de MRO, de respuesta
antibacteriana de neutrófilos, macrófagos, asimismo,
aumento de concentración del producto peroxidación
lipídica 8-isoprostano en pacientes con periodontitis
crónica; las concentraciones séricas de MRO se
asociaron con títulos de anticuerpos altos para
bacterias periodontales: P. gingivalis, P. intermedia y
E. corrodens y en la enfermedad de Behçet (proceso
inflamatorio crónico, con úlceras aftosas orales,
úlceras genitales y uveítis recurrente) se observa
trastornos en leucocitos activados y producción alta
de MRO (4).
Recientemente, el estudio de los antioxidantes
(ascorbato de sodio al 10%, extracto de semilla de
uva al 10%, alfa tocoferol, extracto de semilla de
pino al 10%, gel de aloe vera, entre otros) abarca
terapia restaurativa, periodontal, ortodóntica y
prótesis dental, siendo capaz de modificar el stress
oxidativo (1), en tratamiento estético, como maniobra
previa de adhesión al esmalte tras el blanqueamiento
dental, donde antioxidantes (ascorbato de sodio o alfa
tocoferol) podrían reducir la presencia de oxígeno
luego del blanqueamiento, recuperando valores de
adhesión originales, siendo controversial para otros
autores (31).
La aplicación biomédica de antioxidantes
naturales está limitada por su escasa biodisponibilidad
y estabilidad para cruzar la barrera transdérmica, se
han ideado sistemas de administración y liberación
controlada. Los productos fitoterapéutico en gel,
pueden constituir una alternativa de tratamiento, que
brindaría protección y beneficios sobre los factores de
riesgo comunes a las enfermedades no transmisibles y
enfermedades orales, como en el caso de las lesiones
de la mucosa oral.
El presente trabajo observó actividad antioxidante
del gel a base de extracto hidroalcohólico de Origanum
vulgare, mediante las pruebas DPPH, ABTS FRAP,
donde el mejor poder de captación de radical libre
promedio (Trolox/mg) lo obtuvo el gel al 25%.
Correspondencia:
Luis Hernando Galvez Calla.
Correo electrónico: lgalvezc@unmsm.edu.pe
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Valdés JM, Padrón R, El Ghannam Y. Estrés oxidativo
en las enfermedades bucales. Rev Cubana Estomatol.
2016; 53 (4): 1-8.
2. Bhateja S. Role of antioxidants in oral medicine. Int J
Pharm Sci Res. 2012; 3 (7): 1971-1975.
Actividad antioxidante del gel a base de extracto de Origanum
vulgare ¿Importante para la salud bucal? Estudio preliminar
Galvez-Calla L. y col.
15
Rev Estomatol Herediana. 2021 Ene-Mar;31(1): 6-16
3. Singh N, Niyogi R, Mishra D, Sharma M, Singh D.
Antioxidants in oral health and diseases: Future
Prospects. JDMS. 2013; 10 (3): 36-40.
4. Kesarwala AH, Krishna MC, Mitchell JB. Oxidative
stress in oral diseases. Oral Dis. 2016; 22 (1):9-18.
5. Pedraza J, Eugenio D, Molina E. Uso de Activadores
Naturales de Nrf2 en diversas condiciones patológicas.
En: Cárdenas C, González M, Guevara A, Lara
R, Matuz D, Molina E, Torres PV. Mensaje
Bioquímico. México DF: Facultad de Medicina,
Universidad Nacional Autónoma de México; 2016.p.
211-230.
6. Guija-Poma E, Inocente-Camones MA, Ponce-
Pardo J, Zarzosa-Norabuena E. Evaluación de la técnica
2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH) para determinar
capacidad antioxidante. Horiz Med. 2015; 15(1): 57-
60.
7. Gómez J, Morales G, Ortiz Y, et al. Disminución
del daño nuclear y oxidativo al ADN en pacientes con
periodontitis después de la ingesta de ácido fólico. Rev
Mex Periodontol. 2015; 6(3):121-128.
8. Rodríguez T, Peña M, Gómez N, Santisteban L,
Hernández M. Estrés oxidativo: genética, dieta y
desarrollo de enfermedades. Correo Científico Médico
de Holguín. 2015; 19(4): 690-705.
9. Oroian M, Escriche I. Antioxidants: Characterization,
natural sources, extraction and analysis. Food Res Int.
2015; 74: 10-36.
10. Hoyos-Arbeláez J, Vázquez M, Contreras-Calderón
J. Electrochemical methods as a tool for determining
the antioxidant capacity of food and beverages: A
review. Food Chemistry. 2017; 221: 1371-1381.
11. Fernandes RPP, Trindade MA, Tonin FG, et al.
Evaluation of oxidative stability of lamb burger with
Origanum vulgare extract. Food Chem. 2017; 233:
101–109.
12. Portes W, Gardrat C, Castellan A. A comparative study
on the antioxidant properties of tetrahydrocurcuminoids
and curcuminoids. Tetrahedron 2007; 63 (37): 9092–
9099.
13. Kuskoski EM, Asuero AG, Troncoso AM, Mancini-
Filho J, Fett R. Aplicación de diversos métodos
químicos para determinar actividad antioxidante en
pulpa de frutos. Cienc. Tecnol Aliment. 2005; 25(4):
726-732.
14. Sonawane SK, Arya SS. Citrullus lanatus protein
hydrolysate optimization for antioxidant potential.
Food Measure. 2017; 11: 1834–1843.
15. Organización Mundial de la Salud. Salud bucodental.
Ginebra: Organización Mundial de la Salud; 2020.
(Fecha de acceso: 25 de marzo 2020). Disponible en:
https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/
oral-health
16. Granato D, Shahidi F, Wrolstad R. et al. Antioxidant
activity, total phenolics and flavonoids contents:
Should we ban in vitro screening methods? Food Chem.
2018; 264: 471–475.
17. Gayoso L, Roxo M, Cavero RY, et al. Bioaccessibility
and biological activity of Melissa officinalis, Lavandula
latifolia and Origanum vulgare extracts: Influence of
an in vitro gastrointestinal digestion. Journal of
Functional Foods. 2018; 44: 146-154.
18. García-Pérez JS, Cuéllar-Bermúdez SP, de la Cruz-
Quiroz R. et al. Supercritical CO2 based tailor made
valorization of Origanum vulgare L extracts: A green
approach to extract high-value compounds with applied
perspectives. J Environ Manag. 2019; 232: 796-802.
19. Karadag A, Ozcelik B, Saner S. Review of Methods
to Determine Antioxidant Capacity. Food Anal.
Methods. 2009; 2(1):41–60.
20. Kedare SB, Singh RP. Genesis and development of
DPPH method of antioxidant assay. J Food Sci Technol.
2011; 48(4):412-22.
21. Krishnaiah D, Sarbatly R, Nithyanandam R. A review
of the antioxidant potential of medicinal plant species.
Food and Bioproducts Processing. 2011; 89(3): 217-
233.
22. Carbonel KN, Suárez SA, Salas AI. Características
fisicoquímicas y capacidad antioxidante in vitro del
extracto Gentianella nítida. An Fac Med. 2016; 77(4):
333-7.
23. Harnly J. Antioxidant methods. J Food Comp Anal.
2017; 64 (Part 2): 145-146.
24. Granato D, Sousa J, Galvao L, Sávio D. Chemical
perspective and criticism on selected analytical methods
used to estimate the total content of phenolic compounds
in food matrices. Trends in Analytical Chemistry. 2016;
80: 266-279.
25. Cavero S, García-Risco MR, Marín FR, et al.
Supercritical fluid extraction of antioxidant compounds
from oregano: Chemical and functional characterization
via LC–MS and in vitro assays. J of Supercritical
Fluids. 2006; 38(1): 62-69.
26. Moghrovyan A, Sahakyan N, Babayan A, Chichoyan
N, Petrosyan M, Trchounian A. Essential Oil and
Ethanol Extract of Oregano (Origanum vulgare L.)
from Armenian Flora as a Natural Source of Terpenes,
Flavonoids and other Phytochemicals with Antiradical,
Antioxidant, Metal Chelating, Tyrosinase Inhibitory
and Antibacterial Activity. Curr Pharm Des. 2019;
25(16):1809-1816.
27. Fierascu RC, Ortan A, Fierascu IC, Fierascu I. In vitro
and in vivo evaluation of antioxidant properties of
wild-growing plants. A short review. Curr. Opin. Food
Sci. 2018; 24: 1-8.
28. Teixeira B, Marques A, Ramos C, , et al. Chemical
composition and bioactivity of different oregano
(Origanum vulgare) extracts and essential oil. J Sci
Food Agric. 2013; 93(11):2702-14.
29. Méabed EMH, El-Sayed NM, Abou-Sreea AIB, Roby
Actividad antioxidante del gel a base de extracto de Origanum
vulgare ¿Importante para la salud bucal? Estudio preliminar
Galvez-Calla L. y col.
ARTÍCULO ORIGINAL / ORIGINAL ARTICLE
16
Rev Estomatol Herediana. 2021 Ene-Mar;31(1): 6-16
MHH. Chemical analysis of aqueous extracts of
Origanum majorana and Foeniculum vulgare and their
efficacy on Blastocystis spp. cysts. Phytomedicine.
2018; 43:158-163.
30. Chun SS, Vattem DA, Lin YT, Shetty K. Phenolic
antioxidants from clonal oregano (Origanum vulgare)
with antimicrobial activity against Helicobacter pylori.
Process Biochemistry. 2005; 40(2):809-816.
31. Fenoy I. Influencia de los antioxidantes, ascorbato de
sodio y alfa tocoferol, en la fuerza de adhesión a esmalte
previamente blanqueado con dentífricos blanqueadores.
Tesis Doctoral. Barcelona, España: Universitat
Internacional de Catalunya; 2017. pp. 155.
Recibido : 11-04-2020
Aceptado : 16-12-2020